X-gal

X-gal er en organisk forbindelse, der består af et molekyle af galactose bundet til en substitueret indol. Det er almindeligt anvendt i molekylær biologi.

Anvendelser

Kloning

I genkloning, er X-gal bruges til at angive, når en celle, der udtrykker enzymet β-galactosidase, som kodes af lacZ-genet, i en teknik kaldet blå-hvid-screening.

X-gal spaltes af β-galactosidase producerer galactose og 5-brom-4-chlor-3-idrossindolo. Sidstnævnte oxideres derefter til 5,5'-dibrom-4,4'-dichlor-indigo, et uopløseligt blåt. Så hvis X-gal og en inducer af β-galactosidase tilsættes til en jord-baseret agarose i en dyrkningsplade, kan skelnes bakteriekolonier med et gen "lacZ" funktionel fra den anden.

Når en teknik til kloning af gener ved plasmidvektorer indsat i bakterieceller er optimal, er X-gal bruges til visuelt at lokalisere kolonier af gær eller Escherichia coli, som er blevet transformeret med plasmidvektoren ønskes i en blå-hvid-screening. E. coli-bakterier, som ikke er i stand til at producere enzymet β-galactosidase, transformeres af absorption af plasmidvektoren, som indeholder et insert i den kodende region af lacZ-genet. Når den er behandlet, bakterierne med et plasmid er i stand til at producere enzymet β-galactosidase, som kan adskille X-gal til stede i jorden agar-baseret, hvilket giver anledning til blå kolonier. Bakteriekolonierne stammede fra ikke-transformerede celler er i stand til at adskille X-gal, så forbliver hvid. De plasmidvektorer kan også indkodes anderledes at blokere produktionen af ​​β-galactosidase ved at bringe de transformerede kolonier at udvikle en hvid farve, som bliver blåt, hvis ikke føre plasmidet. Dette er tilfældet med mange kloningsvektorer er tilgængelige på markedet, såsom pGEM-T vektorer Promega, fører lacZα, en trunkeret form af genet af β-galactosidase, og kræver specifikke stammer af E. coli for at opnå α-komplementering.

"Reporter"

LacZ-genet kan anvendes som "reporter" i kombination med dyrkningsmedier indeholdende X-gal. I analysen af ​​Double Hybrid for eksempel, er det afgørende at skelne mellem sådanne gær eller bakterier der har været frugtbar interaktion, hvilket fører til forbindelsen mellem en promotor og en aktivering domæne, og i hvilke celler i stedet er dette ikke avvenuto.Se promotoren er bundet til et lacZ-genet, vil produktionen af ​​β-galactosidase angives ved fremstillingen af ​​blåt pigment af kolonier, der har haft en frugtbar interaktion. På grund af sin manuelle udførelse, er denne teknik anvendes normalt i situationer, hvor antallet af kolonier, der skal skelnes, er mindre end 10. X-gal spaltning forekom også producerer en stærk lugt som følge af fordampning af indol.

Vandanalyse

Udover anvendelsen i molekylærbiologi, er X-gal anvendes til at bestemme indholdet i Escherichia coli og andre coliforme bakterier i prøver af drikkevand.

Forrige artikel Xkcd
Næste artikel Xizor