Antibiogramma

In vitro følsomhed test er en undersøgelse, der vurderer, om en bakterie er følsom over for en bestemt antibiotikum. Især kan det beregne modstanden eller følsomhed eller, hvis vi taler om middel følsomhed, af mikroorganismen for antibiotikummet.

Det er en meget nyttig undersøgelse for at fastslå den mest egnede behandling for visse infektiøse processer startende fra biologisk materiale taget fra patienten, eftersom den muliggør valg af antibiotikum mest egnede til sagen analyseret. Hvis i virkeligheden på pladen anvendt til testen genererede et hvidt halogen og gennemsigtig omkring punktet, hvor antibiotikummet er sået, derefter mikroorganismen ansvarlig for infektionen er følsomme over for det. Hvis man i stedet kolonier af mikroorganismen fortsat at udvide, betyder det, at det er resistent over for antibiotika, der anvendes.

Anvendelse i klinisk og diagnostisk

Problemet med lav ekspression af bakteriel resistens af nogle bakterielle fænotyper er den nye udfordring den traditionelle følsomhed testen står over for.

Et eksempel på et lavt niveau af resistens er, at beta-lactamase, eller ESBL spredt spektrum, der ofte rapporteres som modtagelige men som omfatter svigt af antibiotikabehandling i det lange løb. Derfor brug af automatisk udstyr i de fortolkende algoritmer. Enheden referterà stamme tilsyneladende følsom som resistente. Statistisk analyse af følsomhedstest er også nyttig i hospitalsinfektioner, hvor multiresistente bakteriestammer cirkulerer.

Anbefales Følsomheden test hver gang du nødt til at gennemgå behandling med antibiotika. Dette værktøj i virkeligheden forhindrer indtræden af ​​antibiotikaresistens og tillader brug af målrettede lægemidler i stand til at fremme den fuldstændige udryddelse af den bakterielle stamme.

Hvis på den ene side ABG lidt benyttes til valg af lægemiddel i almindelige infektioner, i betragtning af omkostningerne og tidspunktet for undersøgelsen, den anden del er en fælles procedure og grundlæggende i nosokomielle infektioner og i behandlingen af ​​urethritis, blærebetændelse, gastroenteritis, meningitis, lungebetændelse og al sygdom tilbagevendende.

Regler for byggeri

Resistensbestemmelse for antibiotika eller antibakterielle midler behøver ikke kun at lede antibiotikabehandling, men også for at overvåge udviklingen af ​​bakteriel resistens og derefter give det grundlæggende i empirisk behandling af bakterieinfektioner. NCCLS laver reglerne på internationalt plan om, hvordan du gør testen følsomhed over for antibiotika, klasser af antibiotika, der skal testes osv I praksis er denne analyse standardiseres som en funktion af faktorer, såsom renheden af ​​stammen, der skal testes, tætheden af ​​inoculum inkubationsbetingelserne, fremgangsmåden til at læse resultatet og især de biologiske og kliniske kriterier for fortolkning af resultatet. Du skal også abonnere på eksterne kvalitetskontrol UK-NEQAS eller endda interiør med standard stammer, for at vurdere nøjagtighed og præcision af laboratorieundersøgelser. Der er to traditionelle metoder til fremstilling dell'ABG: af fortyndings- og metoden ved diffusion. Disse metoder anvendes hovedsageligt i særlige tilfælde, med henblik på at kontrollere modstanden af ​​en bakterie til en bestemt antibiotikum. I daglig klinisk praksis præparatet er overdraget til automatiske systemer, der kan beregne MIC og den specifikke følsomhed af de forskellige antibiotika.

Fremgangsmåde til fortynding

Denne metode evaluerer bakterieresistens til en enkelt antibiotikum i stigende koncentrationer; anvendes til at beregne den laveste koncentration af antibiotikum i stand til at hæmme bakterievækst.

Fremstilling af reagensglas

Det bør overvejes en række reagensglas indeholdende et flydende berigelse medium. Det næste skridt er at opnå en seriefortynding af antibiotikummet undersøges at gøre dette kan du fortsætte ved at indgå i det første rør 0,1 ml af midlet antibiotikum. Efter passende blanding, tage 0,1 ml mellemstore antibiotikum fra den første prøve og nedskæringer i den anden. På dette tidspunkt, efter at have foretaget en ny blandet, det tager 0,1 af antibiotisk land fra den anden prøve og passer i den tredje. Vi fortsætter til det sidste rør. På dette tidspunkt får du en række reagensglas, der har faldende koncentrationer af antibiotikum.

Inokulum

Når forberedte rør, skal so inokulering overvejes. Dette fremstilles ud fra en bakteriekultur dyrkes ved 37 ° C i 24 timer. Såningen skal udføres med konstante mængder af inokulum til hvert reagensglas. Koncentrationen af ​​bakterier i podestoffet bør være omkring 1 million per milliliter.

Inkubation og læsning

Prøveemnerne skal sås inkuberes 37 ° C i 24 timer. Efter dette tidspunkt er nødvendigt at vurdere turbiditeten af ​​de enkelte rør, en større indeks, der certificerer udviklingen af ​​bakteriekolonier. Klart rørene med en højere turbiditet vil være en med en lavere koncentration af antibiotikum eller, i vores tilfælde, det seneste tidspunkt. Turbiditeten af ​​jorden vil falde som man undersøger reagensglas med større antibiotisk koncentration. Den første reagensglas indeholdende et plot observeret gennemsigtig, indeholder den laveste koncentration af antibiotikum i stand til at hæmme bakterievækst, også kaldet MIC eller minimale inhiberende koncentration.

MIC og MBC

Når målt MIC også kan bestemme den minimale baktericide koncentration eller MBC, defineret som den laveste koncentration af testforbindelsen er nødvendig for at forårsage død mere end 99,9% af en given organisme. Beregningen er enkel: det er nødvendigt og inkuber pladen materialet i hvert enkelt reagensglas i individuelle dyrkningsmedier. Efter 24 timer, skal den vurdere bakterievækst. Koloniseringen af ​​mediet aftage som du tager hensyn til jord fremstillet under anvendelse af rør med højere koncentrationer af antibiotikum. Den første grund observeret uden kolonier podes medium med en tilstrækkelig mængde af antibiotika for at dræbe eventuelle bakterier til stede i glasset. MBC kan være lig med eller større end MIC.

Metode til formidling

Det er en test af følsomhed af en mikroorganisme til en række antibiotika på plader af fast medium ved hjælp af anvendelsen af ​​antibiotika på fast medium inokuleret med mikroorganismen, der skal undersøges. Det anvendte medium er Mueller - Hinton-agar indeholdende:

  • Kødekstrakt
  • Acid caseinhydrolysat
  • Opløselig stivelse
  • Agar

Den endelige pH bliver 7,3 ± 0,2; Det er meget vigtigt at huske, at jorden skal være homogen, således at de forskellige antibiotika kan spredes med samme hastighed.

Den Mueller - Hinton agar repræsenterer et plot stand til at opfylde de mest almindelige ernæringsmæssige behov hos de mest almindelige bakterier af medicinsk interesse; imidlertid kræsne bakterier, såsom Neisseria gonorrhoeae og Streptococcus pneumoniae skal dyrkes i Mueller - Hinton blod og beriget med mikronæringsstoffer.

For udførelsen dell'antibiogramma, ifølge fremgangsmåden ifølge Bauer og Kirby og anbefalede NCCLS, ved hjælp af Mueller - Hinton agarplader 14 cm eller 9 cm. Som forberedelse af inoculum suspendere 4-5 dyrkede kolonier primære isolering i 4-5 ml tryptisk sojavæske, inkubering i 2-6 timer, indtil dyrkningsvæsken nået samme densitet standard opacimeter fremstillet ved tilsætning til 99,5 ml svovlsyre 0:36 N, 0,5 ml 1% bariumchlorid. På dette tidspunkt bør du være:

  • Pode bakterien, som skal undersøge følsomheden på agaroverfladen
  • Depositum skiver af antibiotika på mediet tørret med sterile pincetter
  • Overhold disken til jorden
  • Inkuber i en termostat ved 37 ° C i 24 timer
  • Fortsæt at læse størrelsen af ​​hæmningszoner.

Læsning af værdier og overvejelser

De værdier, du måtte have, til almindelige antibiotika er 3:

  • Alene af 1-9 millimeter resistente bakterie
  • Alene på 10 til 18 millimeter: bakterie med mellemliggende modstand
  • Alene på 19 til 30 millimeter: de modtagelige bakterier

Det er imidlertid ikke korrekt at tillægge større effektivitet over for et antibiotikum, der har en større zone af inhibering sammenlignet med et andet antibiotikum. Dannelsen af ​​halo afhænger af:

  • Molekylvægt: et molekyle af antibiotikummet med en lavere molekylvægt, det har en tendens til at frembringe en større zone af inhibering som følge af den større evne til at diffundere ind i agar.
  • Form af molekylet: et antibiotikum, der har en mere kompakt struktur vil migrere længere skabe en større inhiberingszone
  • Elektriske ladninger: siden agar er rig på SO4-ioner, antibiotika positivt ladede straks en tendens til at obligation med de negative molekyler tættest på disketten antibiotikum. Denne begivenhed hæmmer migrationen af ​​antibiotikummet, genererer haloer mindre end de negativt ladede molekyler.

Altså: en sammenligning mellem hæmningszoner bør kun være mellem antibiotika i samme gruppe, som vil have former, vægt og opkræve lignende. For eksempel kan du gøre test mellem flere typer af penicilliner og ikke mellem penicillin og tetracyclin.

Imidlertid er anvendelsen af ​​en jord for kun én type antibiotika er ganske ubehageligt og dyre. Den nuværende praksis er at bruge omfattende grund af Mueller - Hinton, med forskellige former for antibiotika. De hæmmende zoner derefter evalueres baseres på skalaerne præformede, der styrer operatøren i at læse dell'antibiogramma.
For eksempel rifampicin, shows, i de mest almindelige afgrøder, hæmningszonernes meget store, mens teicoplanin i kraft af den udvidede molekylære kropsbygning, vil have små hæmningszoner; så teicoplanin det vil have sin egen følsomhed skala, meget forskellig fra dens rifampicin.

Analyse af samspillet mellem antibiotika

I klinisk praksis er de ofte anvendes kombinationer af lægemidler til behandling af bakterielle infektioner. Den mikrobiologiske laboratorium er i stand til at etablere synergi og antagonisme mellem forskellige lægemidler ved en modifikation af metoden til Bauer og Kirby. For eksempel, hvis du ønsker at teste følsomheden af ​​Proteus mirabilis at cefotaximide associerede clavulansyre, kan du oprette en grund på Mueller - Hinton podet med P. mirabilis og eksperimenterede med de to skiver af antibiotika placeret på en standard afstand. Fra billedet, der inspirerede eksempel kan du se, at glorie af cefotaximide strækkes mod zone hæmning af clavulansyre. Resultatet er klart; selvom clavulansyre ikke kan i sig selv at sikre en god glorie inizione, i grænseområderne, hvor det begynder at miste sin indsats, er det i stand til synergistisk øge virkningen af ​​cefotaximide, selv om de to antibiotika er concencentrazioni meget lav. Denne enkle test det muligt at vurdere synergien mellem flere lægemidler, konstateringen af, at fremhæves også i rapporteringen. Det er dog også muligt at evaluere den modsatte effekt, inhibering, fremgår af en byge af inhiberingen halo af et lægemiddel i grænseområderne i et bestemt antibiotikum. Den synergistiske virkning mellem multiple stof er anvendt i terapi af bakterier vanskelige og recidiverende, med særligt gode resultater i behandlingen af ​​nosokomielle infektioner. Den synergistiske virkning mellem amoxicillin og clavulansyre er ofte brugt til behandling og profylakse af bakterielle pharyngitis og godartet infektion af luftvejene.

Etest

Testen epsilometrico, også kaldet Etest, er en variant af fremgangsmåden meget brugt i dag ved diffusion.
Testen fremstilles ved anbringelse i Mueller Hinton agar én eller flere rektangulære strimler af filtrerpapir, der indeholder skalare koncentrationer af antibiotikum, som vi ønsker at teste aktiviteten. Efter inkubationen er at fremhæve en hæmningszone at falde omkring toppen af ​​strimlen; især vil bunden af ​​dråben blive vendt mod den øvre del af strimlen, medens spidsen af ​​dråben vil blive vendt mod bunden af ​​strimlen.
Sammenligningen af ​​amplituden af ​​dråber af hæmning mellem strimler indeholder forskellige antibiotika, der er forbundet med vurderingen af ​​de standardværdier, giver mulighed for hurtig identifikation af de mest effektive stof til bakterien.
Også denne fremgangsmåde tillader hurtig vurdering af den minimale inhiberende koncentration; faktisk det punkt, hvor spidsen af ​​dråben opfylder strimlen, svarer til den mindste koncentration af antibiotikummet stadig i stand til at hæmme bakterievækst.

Rapportering

Den mikrobiologiske laboratorium er ikke begrænset til at angive den bedste antibiotikum, det giver en komplet liste over de antibiotika, der anvendes sammen med det respektive MIC og effektivitet. Nogle gange, skal den også angive sammenslutninger af antibiotika, der kan bruges. Nytten af ​​et så stort rapportering er klar: læge kan ordinere et antibiotikum givet i forhold til

  • Indgivelsesmåde
  • Overfølsomhedsreaktioner kendt emne
  • Farmakokinetik
  • Lægemiddelinteraktioner
  • Bivirkninger
  • Omkostninger af lægemidlet

Anvendelsen af ​​antibiotika såsom specifikke gør det muligt at undgå brugen af ​​bredspektrede antibiotika, som bør være at ødelægge kommensale flora af emnet, der kan konkurrere med opportunistiske patogener, såsom Candida albicans, Clostridium difficile og Pseudomonas aeruginosa.

Forrige artikel Artur Balder
Næste artikel Arcangelo Corelli